单个样本RNA总量不够 多样本混合算生物学重复吗？ 返回
在RNA类项目中，老师经常会遇到一个问题：某些物种个体过小，如果单个个体提取RNA的话，总量不够。但如果多个个体混合，构建RNA池的话，个体的信息已经丢失。对于混合后的样本如何设置生物学重复，或者说，混合的RNA样本是否可以作为生物学重复，有时候会成为老师犹豫的问题。
我们再来回顾一下生物学重复和技术重复的定义。生物学重复指不同生物样本做同样实验，就是实验本身用不同的样本重复三次。技术重复是指对一个生物样本的实验指标测定多次，就是对每个材料的实验数据平行测三次。
而这里所说的生物学样本，并非限定必须是个体。一组同类个体构成的群体，同样可以构成一个生物学样本。所以，这样的三组样本，独立进行三组相同的处理，对每一组样本混合取样并测序，同样可以构成三个生物学重复（如下图）。当然，如果你只测一组就不算生物学重复。
当然，以上提到的顾虑，也是研究大型动植物的老师的幸福的烦恼，因为个体取样通常也能取到足够的RNA量。研究微生物的老师，从来不顾虑这个问题。因为单个细菌的RNA量肯定是不够的。微生物研究涉及的生物样本，从来都是一个群体，生物学重复当然也是群体水平的重复。
另外，使用群体混样作为生物学重复还有一个优点。在某些情况下，您的样本可能遗传背景差异特别巨大。如果一个个体作为一个生物学重复，遗传背景的随机差异，可能会掩盖实验处理的影响。在这个情况下，使用一定大小的群体（例如随机挑选10个个体）同时进行实验处理，然后混样作为一个生物学重复，反而能够减少生物学重复样本间的遗传背景差异。用统计学的语言来说就是，随机抽样群体（由n个随机个体构成）的标准差小于随机抽样个体的标准差（群体水平Sd=个体水平Sd/n），从而减少遗传方差对实验结果的影响，以便更好检测不同处理差异（这通常才是实验的目标）对样本的影响。
